

目前国内流感疫苗渗透率低,与发达国家仍有巨大差距,国内流感疫苗仍存在巨大的成长空间。美莱德拥有完善的流感疫苗一站式生物分析服务,可对临床试验生物样本进行全流程监管,降低项目管理难度,提高研发效率,加速流感疫苗产品的上市进程,为流感疫苗的研发提供有力支持。


小编将会从以上流感疫苗生物分析的五大板块为大家分期介绍,往期回顾:
MED生物分析 | 美莱德流感疫苗研发一站式服务(一)—— HI法检测血清样本中HI抗体的检测流程及方法学验证
本期为大家分享:美莱德流感疫苗研发一站式服务(二)—— 流感病毒中和抗体检测方法分享

流感疫苗或自然感染的引起免疫的反应可通过血清学技术进行评估,最常见的方法有血凝抑制(Haemagglutination inhibition, HI)、单向扩散溶血(Single radial haemolysis, SRH)和病毒中和试验,ELISA虽不是官方推荐的方法,但也能用于检测不同种类的特异性抗体。其中病毒中和试验是一种敏感性高、特异性强的血清学检测方法,能检测受试血清中的特异性抗体,常以微量中和(Micro-Neutralization, MN)的方式进行。
1、微量中和MN原理
将流感病毒与受试者血清混合,使病毒与血清中的抗体充分反应,再用混合物感染敏感细胞,通过测定残存病毒的感染力反推算出血清流感中和抗体的滴度。
注:血清中能与病毒结合,并使病毒失去感染力的抗体称为中和抗体。
2、MN操作方法
(1)细胞接种:提前接种敏感细胞,确保检测时细胞汇合度足够;
(2)病毒感染:梯度稀释待测血清后,将其与等体积确定滴度的病毒混合,适宜条件下孵育一段时间,确保病毒与中和抗体反应完全,然后接种至细胞板;
(3)检测与分析:依次进行细胞固定→破膜→一抗孵育→二抗孵育→显色步骤,将细胞板置于酶标仪或酶联斑点分析仪进行检测。(详见下图)

图2. MN检测流程图
3、MN精准检测,高准度呈现
HI检测是欧洲药品管理局(European Medicines Agency, EMA)正式认可的流感临床血清中和抗体的检测方法,具有快速、经济和易操作的特点,是流感血清中和抗体检测的金标准。近年有研究表明,MN对A株和B株的四种血清型的中和抗体检测结果与HI的检测结果存在较强的正相关(见图3),与ELISA法也存在类似的趋势。


图3. MN与HI对四种毒株中和抗体检测结果的相关性评估
在另一项研究中,实验者对用细胞制备的三价流感疫苗(cell-grown trivalent influenza vaccine, TIVc)和鸡胚制备的四价流感疫苗(egg-grown adjuvanted quadrivalent influenza vaccine, aQIVe)进行疫苗实验。结果显示,MN和HI对不同来源的疫苗产生的血清中和抗体的检测结果也呈现类似的强相关性(见图4),这意味着MN与HI检测的结果一致性不只局限于某一类样本,甚至可能适用于所有类型的样本。也许在不久的将来,MN会成为临床上检测流感血清中和抗体的重要方法之一。
图4. MN与HI对两种疫苗/不同毒株的中和抗体检测结果的相关性评估
目前,美莱德生物分析中心已完成ATCC和NIBSC来源的甲型H1N1、H3N2和乙型BY、BV的共14个流感毒株的病毒库建立,同时建立了多个种属(小鼠、雪貂、大鼠等)的流感HA病毒滴度检测和HI血清中和抗体检测方法,并完成了特异性、灵敏度、精密度、相对准确性等指标的验证,能够满足不同种属的生物样本检测要求。本期为大家分享了:美莱德流感疫苗研发一站式服务(二)—— 流感病毒中和抗体检测方法分享下期将为大家分享:美莱德流感疫苗研发一站式服务(三)—— 流感病毒滴定检测:PCR法,敬请期待!
[1] Trombetta CM, Remarque EJ, Mortier D, Montomoli E. Comparison of hemagglutination inhibition, single radial hemolysis, virus neutralization assays, and ELISA to detect antibody levels against seasonal influenza viruses. Influenza Other Respir Viruses. 2018 Nov;12(6):675-686. doi: 10.1111/irv.12591. Epub 2018 Aug 11. PMID: 30019448; PMCID: PMC6185893.[2] Heeringa M , Leav B , Smolenov I ,et al.Comparability of Titers of Antibodies against Seasonal Influenza Virus Strains as Determined by Hemagglutination Inhibition and Microneutralization Assays[J]. Journal of Clinical Microbiology, 2020(9):58.DOI:10.1128/JCM.00750-20.




