目前国内流感疫苗渗透率低，与发达国家仍有巨大差距，国内流感疫苗仍存在巨大的成长空间。美莱德拥有完善的流感疫苗一站式生物分析服务，可对临床试验生物样本进行全流程监管，降低项目管理难度，提高研发效率，加速流感疫苗产品的上市进程，为流感疫苗的研发提供有力支持。

小编将会从以上流感疫苗生物分析的五大板块为大家分期介绍，往期回顾：

MED生物分析 | 美莱德流感疫苗研发一站式服务（一）—— HI法检测血清样本中HI抗体的检测流程及方法学验证

本期为大家分享：美莱德流感疫苗研发一站式服务（二）—— 流感病毒中和抗体检测方法分享

流感疫苗或自然感染的引起免疫的反应可通过血清学技术进行评估，最常见的方法有血凝抑制（Haemagglutination inhibition, HI）、单向扩散溶血（Single radial haemolysis, SRH）和病毒中和试验，ELISA虽不是官方推荐的方法，但也能用于检测不同种类的特异性抗体。其中病毒中和试验是一种敏感性高、特异性强的血清学检测方法，能检测受试血清中的特异性抗体，常以微量中和（Micro-Neutralization, MN）的方式进行。

1、微量中和MN原理

将流感病毒与受试者血清混合，使病毒与血清中的抗体充分反应，再用混合物感染敏感细胞，通过测定残存病毒的感染力反推算出血清流感中和抗体的滴度。

注：血清中能与病毒结合，并使病毒失去感染力的抗体称为中和抗体。

2、MN操作方法

（1）细胞接种：提前接种敏感细胞，确保检测时细胞汇合度足够；

（2）病毒感染：梯度稀释待测血清后，将其与等体积确定滴度的病毒混合，适宜条件下孵育一段时间，确保病毒与中和抗体反应完全，然后接种至细胞板；

（3）检测与分析：依次进行细胞固定→破膜→一抗孵育→二抗孵育→显色步骤，将细胞板置于酶标仪或酶联斑点分析仪进行检测。（详见下图）

图2. MN检测流程图

3、MN精准检测，高准度呈现

HI检测是欧洲药品管理局（European Medicines Agency, EMA）正式认可的流感临床血清中和抗体的检测方法，具有快速、经济和易操作的特点，是流感血清中和抗体检测的金标准。近年有研究表明，MN对A株和B株的四种血清型的中和抗体检测结果与HI的检测结果存在较强的正相关（见图3），与ELISA法也存在类似的趋势。

图3. MN与HI对四种毒株中和抗体检测结果的相关性评估

图4. MN与HI对两种疫苗/不同毒株的中和抗体检测结果的相关性评估