肺炎链球菌是全球公认的高致病性病原菌，可引起脑膜炎、菌血症、菌血症性肺炎等严重的侵袭性疾病，也可引起急性中耳炎、鼻窦炎等其他疾病。它是肺炎或呼吸道感染患儿的首位病原体，也是老年人社区获得性肺炎的重要病原体[1]。肺炎链球菌性疾病是全球主要的公共卫生问题之一。接种疫苗是预防肺炎链球菌感染的有效手段[2]，而疫苗免疫原性评价是衡量疫苗有效性的核心环节，直接关系到研发进程与上市成败。
在调理吞噬杀菌实验中，通常采用两种方法来评估吞噬细胞的杀菌功能：
调理吞噬杀菌实验的核心逻辑，是在实验室环境中还原人体免疫系统对抗肺炎链球菌的关键过程，为疫苗功能评价提供直观、量化的依据：
特异性抗体先与细菌荚膜结合，并激活补体系统，在细菌表面沉积调理素—相当于给吞噬细胞贴上“识别标签”，帮其快速锁定目标。分化成熟的吞噬细胞（HL-60细胞系），通过其表面的Fc受体和补体受体识别被标记的细菌，随后将其吞噬并启动胞内杀菌程序。
建立稳定、高效的调理吞噬杀菌实验体系，是保障疫苗评价结果准确的基础。我们通过反复摸索与系统性优化，重点攻克细胞分化、靶菌制备、补体控制三大行业共性难点，形成了一套标准化、可重复的实验流程[6]。
HL-60细胞的分化状态直接决定吞噬效率，是肺炎调理吞噬杀菌实验成功的核心前提，我们采用不超过35代的细胞，通过二甲基甲酰胺（DMF）浓度和分化时间的摸索，我们建立了细胞标志物表达达到理想状态（CD35的表达（CR1补体受体）≥55%，CD71的表达（增殖标志）≤20%。）的分化条件。
对于某些易受补体旁路途径攻击的血清型（如6B），发现通过靶菌生长状态的调整或使用无荚膜的肺炎球菌处理补体，可有效降低NSK[7]，保障检测结果准确。
此外，同一项目的研究样本使用同一批次补体，避免因补体批次差异导致的数据偏差，确保实验结果具有可比性。
采用国际公认的标准血清007SP，对建立的实验方法进行准确度、精密度、特异性等验证，验证结果显示，该实验具有良好的准确度、精密度、特异性，采用该方法对接种13价肺炎多糖结合疫苗的志愿者采集的血清进行分析，结果显示：
对1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F血清型的调理吞噬杀菌检测滴度均大于1:8，而对13价肺炎结合疫苗中不含有的2、8、9N、10A、11A、12F、15B、17F、20、22F、33F血清型的调理吞噬杀菌检测滴度均处于较低的基线水平。此结果与预期结果高度一致，充分展示了该方法在捕捉真实免疫反应方面的卓越能力。
当前，调理吞噬杀菌技术的广泛应用仍面临操作复杂、周期长、关键试剂成本高等挑战。我们建立的标准化实验体系，通过流程优化与质控升级，在保障检测准确性的同时，有效提升了检测效率、降低了研发成本，为开展肺炎球菌疫苗及未来新型疫苗的免疫效果评价奠定了坚实的方法学基础。
作为专业 CRO 机构，我们可为疫苗研发企业提供全方位调理吞噬杀菌检测服务，涵盖肺炎链球菌多血清型疫苗的免疫原性评价、临床样本检测、方法学验证、注册申报支持等核心需求，助力企业缩短研发周期、降低研发风险，为疫苗上市提供坚实的技术支撑。
未来，我们将持续深耕疫苗检测技术创新，不断优化实验体系、拓展检测服务范围，为全球疫苗研发企业提供更高效、精准、合规的一体化研发服务，与行业伙伴携手，共同推动肺炎链球菌疾病防控事业发展。
参考文献：
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[7] Burton RL, Nahm MH. Development of a fourfold multiplexed opsonophagocytosis assay for pneumococcal antibodies against additional serotypes and discovery of serological subtypes in Streptococcus pneumoniae serotype 20[J]. Clinical and Vac
